人白介素38(IL-38)检测试剂盒(ELISA方法)

产品货号：

ZN2269

中文名称：

人白介素38(IL-38)检测试剂盒(ELISA方法)

英文名称：

Human Interleukin-38 ELISA Kit

产品规格：

96T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中 IL-38的含量。

检测原理

预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人IL-38呈正相关。

产品组成

组分	规格	数量
预包被抗人IL-38抗体的96孔板	96T	1板
重组人IL-38标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗人IL-38(100X)	100μL	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	100μL	1管
样品稀释液	30mL	1瓶
抗体稀释液	12mL	1瓶
ABC稀释液	12mL	1瓶
TMB显色液	10mL	1瓶
终止液	10mL	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20mL	1瓶
封板膜		4张

保存：2～8℃，有效期6个月。

自备器材

标准规格酶标仪。
自动洗板机。
恒温箱
系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。
干净的试管和Eppendof管。
用去离子水将25X洗涤缓冲液稀释25倍，成1X洗涤缓冲液。

使用前TMB显色液应为无色透明溶液，若发现颜色异常，请及时与我司联系。
用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板，用户可按需求使用；剩余的酶标板请按保存条件贮存。
揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将1X洗涤缓冲液至少300μL注入孔内，浸泡1～2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血清：用干净试管收集血液，室温凝固30分钟，离心1000×g 15分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
血浆：用干净试管收集，EDTA或肝素抗凝血液，30分钟内离心，离心1000×g 15分钟，收集血浆。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液，用枪吹打把细胞吹散，用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同，分别采取不同的稀释方案，以下方案仅供参考，样品的稀释应有详细记录。

高：指待测因子在40～400ng/mL。一般按1:100稀释。297μL样品稀释液加3μL样品。
中：指待测因子在4～40ng/mL。一般按1:10稀释。225μL样品稀释液加25μL样品。
低：指待测因子在62.5～4000pg/mL。按1:2稀释。100μL样品稀释液加100μL样品。
特低：指待测因子≤62.5pg/mL。样品一般不做稀释，或按1:2稀释。

人IL-38标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。试剂盒提供2管标准品，每管10ng，每次使用1管。
- 配制10000pg/mL标准品：取1mL样品稀释液加入标准品管内，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解。
- 配制4000pg/mL标准品：取0.4mL 10000pg/mL的标准品加入有0.6mL样品稀释液的Eppendorf管中，混匀，做上标记。
- 配制2000pg/mL～62.5pg/mL标准品：准备6只Eppendorf管，每管加0.3mL样品稀释液，分别标记上2000pg/mL，1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL。取0.3mL 4000pg/mL的标准品加入标记2000pg/mL的管中，混匀后同样取出0.3mL，加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管。
  注意：已经稀释的标准品(10000pg/mL)，应在12小时内使用。-20℃冷冻保存条件下，2天内可以使用，不能反复冻融。
生物素标记抗人IL-38抗体工作液的准备：在使用前2小时内准备。
- 根据每孔需要100μL计算总的用量(实际配制时应多配制100～200μL)。
- 按1μL生物素标记抗人IL-38加抗体稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备：在使用前1小时内准备。
- 根据每孔需要100μL计算总的用量(实配时应多配制100～200μL)。
- 按1μL亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。

已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时，切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量，决定适当的稀释倍数。

确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目，并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9；做双份检测时×2。其余重包装好放入冰箱中。
将4000pg/mL，2000pg/mL，1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL的标准品各100μL依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清，每孔加100μL已用样品稀释液稀释的样品。
酶标板加上封板膜，37℃反应90分钟。
反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。不洗。
将准备好的生物素抗人IL-38抗体工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
酶标板加上封板膜，37℃反应60分钟。
1X洗涤缓冲洗涤3次，每次浸泡1分钟左右(每孔洗液至少300μL)。将准备好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
酶标板加上封板膜，37℃反应30分钟。
1X洗涤缓冲洗涤5次，每次浸泡1～2分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应15～20分钟。
注意：显色时间供参考，因用户实验室条件差异，最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3～4孔有明显的梯度蓝色，后3～4孔差别不明显。
按每孔100μL依次加入终止液，顺序同加TMB。此时蓝色立转黄色。
用酶标仪在450nm测定O.D.值。
有两种设定空白对照的方案：
① 将TMB空白显色孔(只加TMB显色液和终止液)设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去TMB空白显色孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲线，以吸光值作为纵坐标，以浓度作为横坐标。
② 将零孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后，得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

加样品和标准品，37℃反应90分钟。不洗。
加生物素标记抗体，37℃反应60分钟。1X洗涤缓冲液洗涤3次。
加ABC，37℃反应30分钟。1X洗涤缓冲液洗涤5次。
TMB 37℃反应15～20分钟。
加入终止液，读数。

TMB在37℃反应20分钟。(数据供参考，不同用户最佳显色时间会有所不同)

浓度	0.0pg/mL	62.5pg/mL	125pg/mL	250pg/mL	500pg/mL	1000pg/mL	2000pg/mL	4000pg/mL
O.D.	0.049	0.108	0.148	0.249	0.449	0.822	1.308	2.045

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